产品简介

HBV模型产品

rAAV8-1.3HBV


rAAV8-1.3HBV是北京五加和技术团队于2010年推出的一款自主研发的HBV模型产品,它是一种携带1.3拷贝HBV全长基因组的重组AAV8病毒。通过向小鼠尾部静脉注射rAAV8-1.3HBV制备持续性HBV感染的动物模型。

rAAV8-1.3HBV注射小鼠等模型因制备简单、成模率高、均一性稳定性好、量效关系好、适用范围广已被广泛应用于HBV药物和疫苗的筛选和评价以及基础研究领域。该模型大幅缩短了乙肝药物研发临床前动物实验阶段的准备时间,大幅降低了成本,效果获得巨大提升,在乙肝治疗方案和新药研究方面起到加速推动的作用。


产品原理及应用示意图
产品使用方法
解冻: 产品使用前在25±5℃条件下水浴解冻,解冻后置于冰上,使用前充分混匀。
【体内使用方法】
rAAV8-1.3HBV用于建立HBV动物模型

· rAAV8-1.3HBV应采用尾静脉注射方式给药。4~6周C57BL/6小鼠的推荐剂量为5E+10~2E+11vg/只,注射体积为200µL。
· 注射前用无菌PBS或提供的产品稀释液将产品稀释至需要的基因组滴度(vg/mL)。
· rAAV8-1.3HBV感染动物后,动物体内HBV DNA的复制水平、HBsAg和HBeAg的表达水平及持续时间可能随着实验动物的物种和免疫状态不同而有所差异,且呈剂量依赖性,建议根据所选动物和实验目的进行剂量条件优化。
· 由于不同批次间产品的基因组滴度与感染活性略有波动,建议在使用新批次产品时进行剂量条件优化。

【体外使用方法】
rAAV DJ-1.3HBV用于体外细胞转导

· rAAV DJ-1.3HBV 在体外可有效感染HepG2、Huh7和人原代肝细胞。通常在转导48小时后可以检测到HBV DNA的复制、HBsAg 和 HBeAg的表达,并且可持续一周以上。
· 确定MOI(Multiplicity of infections):MOI为每个感染的病毒基因组的数量,MOI为1意味着每个细胞感染1个病毒基因组。建议在1E+3~1E+5之间优化MOI。
· 弃去原细胞培养基,将含有rAAV DJ-1.3HBV的新培养基加入到相应含有细胞的培养孔中。以下是加入体积的一般建议:
24孔板:0.2~0.3mL/孔
12孔板:0.5~0.8mL/孔
6孔板:2mL/孔
60mm培养皿:3~4mL/皿
10cm培养皿:8~12mL/皿
· 转导后2~8小时,可向培养基中加入5~20mM丁酸钠,通常能提高基因表达。
· 由于不同批次间产品的基因组滴度与感染活性略有波动,建议在使用新批次产品时进行剂量条件优化。